二氧化碳培養(yǎng)箱提供了細(xì)胞生長環(huán)境,為了正確使用,根據(jù)它的結(jié)構(gòu)和性能要 求,介紹培養(yǎng)箱正確使用方法、常見故障的預(yù)防和處理。

多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)時需37℃、5%CO2張力和飽和濕度的生長 條件,CO2培養(yǎng)箱提供了細(xì)胞生長環(huán)境。目前國內(nèi)生物研究室 多數(shù)使用的是熱導(dǎo)型二氧化碳培養(yǎng)箱, 5萬～5. 5萬元,使用壽命10年，但在日常的使用過程中，平均使用6.5年，其損壞原因為傳感器損壞，然后正確使用根據(jù)它的結(jié)構(gòu)和性能要求，無疑是讓其發(fā)揮正常工作及工作年限最好的方式。

1.    溫度傳感器保護(hù):培養(yǎng)箱溫度由溫度傳感器控制,它的 正常運行需要25℃室溫條件。常規(guī)使用時,箱內(nèi)放1～2支水 銀溫度計作為溫度對照。溫度傳感器的正確運行,使設(shè)定溫度 數(shù)、箱面顯示數(shù)和箱內(nèi)溫度三者一致。夏季使用培養(yǎng)箱時,無 菌室應(yīng)保持25℃左右室溫。

2.  氣體傳感器保護(hù):箱內(nèi)氣壓由CO2氣體傳感器控制。CO2傳感器正常反饋要求進(jìn)氣壓為0. 06兆帕。 開門后,箱內(nèi) 氣體丟失,CO2壓力下降。關(guān)門后,CO2傳感器在低壓刺激下 有節(jié)奏地開閉,向箱內(nèi)慢慢充氣,當(dāng)進(jìn)氣壓達(dá)0. 06兆帕?xí)r,自 動停止調(diào)節(jié)。換氣瓶時,部分實驗者針對進(jìn)氣壓,采用加大進(jìn) 氣壓的快速充氣法,使用0. 1兆帕甚至0. 2兆鉑壓力,無形中 損傷了CO2傳感器。開始這種損傷效應(yīng)不能顯示,實驗者不 能察覺,反復(fù)錯誤操作, CO2傳感器損傷累積最終致命損壞,使 氣壓調(diào)節(jié)失靈。當(dāng)實驗者發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基顏色變化異常、細(xì)胞生長 緩慢時,已無法挽救損壞?，F(xiàn)將氣壓調(diào)節(jié)歸納為4句話17個字:反時針?biāo)珊?接 氣瓶,順時針減壓,進(jìn)氣壓0. 06。安民告示,張貼箱門,使每個實驗者都會操作。為防止漏氣,在氣瓶出口處填膠皮,氣壓表 接頭處纏封口帶,氣瓶與氣壓表連接后,肥皂水試驗,接口無氣 泡出現(xiàn)為連接合格。

3.  CO2零點飄移監(jiān)控:培養(yǎng)箱使用過程中, CO2氣壓零點 會發(fā)生自然飄移現(xiàn)象,這種現(xiàn)象不能在箱面氣體顯示框中表現(xiàn) 出來,實驗者也不易覺察到飄移結(jié)果細(xì)胞培養(yǎng)液顏色變化異 常、細(xì)胞生長緩慢甚至死亡。CO2氣壓零點是否飄移,可通過CO2氣體測試儀,取箱內(nèi)氣體檢查確定。如我們測試了6臺細(xì) 胞培養(yǎng)箱,它們的顯示值都為5%,測試結(jié)果為2臺箱內(nèi)外氣 壓值一致,其余4臺中箱內(nèi)氣壓值最高18%,最低0. 5%,這些 異常氣壓值培養(yǎng)箱影響了細(xì)胞實驗結(jié)果。因此,實驗室應(yīng)建立CO2氣壓零點測試制度,通常每3個月進(jìn)行1次,以保證CO2氣壓實際使用值的正確。

4.    二氧化碳培養(yǎng)箱飽和濕度監(jiān)控: CO2培養(yǎng)箱使用過程中,要求在 箱內(nèi)托盤中放一定量的滅菌水( 3/2至全盤) ,使箱內(nèi)為飽和濕 度環(huán)境,這是針對開放培養(yǎng)細(xì)胞要求設(shè)計的。因為飽和濕度環(huán) 境可以避免培養(yǎng)液中CO2逃逸,培養(yǎng)液中pH值穩(wěn)定,有利于 細(xì)胞生長。實際使用過程中,實驗者常忘記補(bǔ)加水,使培養(yǎng)細(xì) 胞處于低濕度甚至干熱環(huán)境中,培養(yǎng)液CO2氣體易揮發(fā),液體pH值升高,影響細(xì)胞生長。為避免此問題發(fā)生,我們采用箱 面大字警告和值日生負(fù)責(zé)制相結(jié)合的方法,能較好地落實這一 措施。此外,針對箱內(nèi)濕熱環(huán)境易滋生細(xì)菌等問題,我們采用 在1 000ml水中加2ml新潔爾滅液,定期用酒精和紫外線消毒 箱內(nèi)空氣,培養(yǎng)物酒精擦拭入箱內(nèi),以減少箱內(nèi)微生物滋生速 度。實驗多時,箱內(nèi)分區(qū)存放,培養(yǎng)物用筐或瓷盤存放,這樣存 取快速,縮短開門時間,減少箱內(nèi)氣體和濕度變化,節(jié)省氣體,穩(wěn)定了細(xì)胞生長環(huán)境。

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