【干貨】制備液相的使用及技術(shù)特點(diǎn)！

制備型高效液相色譜儀通常都被認(rèn)為和大容量色譜柱和高流速有關(guān)聯(lián)的。然而并不是以設(shè)備的大小和系統(tǒng)消耗的流動(dòng)相的多少來決定制備高效液相色譜，而是依據(jù)分離目的來決定。與分析液相不同，制備液相的目的是對(duì)產(chǎn)品的單體進(jìn)行提取和純化。關(guān)于制備液相小析姐今天要跟你聊一下，快準(zhǔn)備好你的小本本吧。

與傳統(tǒng)的純化方法（如蒸餾、萃?。┍容^，制備液相是一種更有效的分離方法，因此被廣泛應(yīng)用在樣品和產(chǎn)品的提取和純化上。隨著合成、植化、生化和制藥等領(lǐng)域?qū)Ω呒兌冉M份的需求不斷增加，制備型液相色譜儀應(yīng)用的領(lǐng)域也在迅速的擴(kuò)大發(fā)展。

制備液相與分析液相的區(qū)別

和制備液相對(duì)應(yīng)的，是分析液相。它們的最大差別，不在于外形，而在于目的。分析液相的目的當(dāng)然是為了分析樣品，有什么成分，含量多少，也叫做定性定量。要做好分析液相，最關(guān)注的是分離度和靈敏度，要分得開，測得到，測得準(zhǔn)。而制備液相是利用色譜柱的分離能力，來去除雜質(zhì)，得到高純樣品。為什么強(qiáng)調(diào)純度呢？
在實(shí)驗(yàn)室里，紅外、紫外、核磁這些儀器，都要求樣品達(dá)到足夠的純度，才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。除了實(shí)驗(yàn)室，藥品的生產(chǎn)也需要純化，特別是生物制品和藥劑。很多生物制品如果是直接吃下去，跟吃個(gè)雞蛋也沒什么不同，直接注射才能保留活性成份。而注射治療，藥物會(huì)直接進(jìn)入血液，所以純度非常重要。在實(shí)驗(yàn)室里，用于制備的液相，配置和普通的分析液相差不多。有泵，有進(jìn)樣器，有柱子，有檢測器。為了收集分離出來的化合物，制備液相通常還配一個(gè)餾分收集器。餾分收集器就像液相色譜的收納盒，把每次分析的同類物質(zhì)收納到一起。餾分收集器可以直接串聯(lián)在檢測器后面。也可以連接一個(gè)三通，和檢測器并聯(lián)，都接在色譜柱的后面。有些實(shí)驗(yàn)室里需要收集的量很大，一個(gè)餾分收集器裝不完，還可以并聯(lián)好幾個(gè)。根據(jù)檢測器的信號(hào)顯示，當(dāng)化合物出峰的時(shí)候，儀器會(huì)自動(dòng)收集。一般按照時(shí)間編程，也可以根據(jù)檢測器的信號(hào)強(qiáng)度自動(dòng)觸發(fā)。一個(gè)個(gè)化合物通過餾分收集器收集到小瓶或者試管里，也可以通過管路連接到更大的瓶子。
制備液相有很多種分類方法，比如按壓力分類，或者按產(chǎn)量分類，彼此之間有交叉，沒有明確的標(biāo)準(zhǔn)。不同類型的制備液相有著不同的特點(diǎn)。比如這根用在生產(chǎn)上的制備液相柱，模樣和實(shí)驗(yàn)室里有些不同。僅僅內(nèi)徑就有1.6m，色譜柱的重量有36噸重，每天消耗的流動(dòng)相能放滿半個(gè)小游泳池。除了特別大的，還有特別小的。比如微克級(jí)制備，也常被稱為微量制備，它的有趣之處在于微量餾分收集器，可以直接使用MALDI點(diǎn)樣板。

制備色譜柱的材質(zhì)及其特點(diǎn)

各種規(guī)格的玻璃柱子在實(shí)驗(yàn)室里頭很容易得到，而且價(jià)格低廉，但玻璃柱子致命的弱點(diǎn)是它能承受的壓力很小，且非常容易破碎。當(dāng)由于壓力太小而導(dǎo)致流動(dòng)相流速很慢的時(shí)候，高位液面或加高壓空氣（或者氮?dú)猓┑牟捎檬且粋€(gè)簡單的解決辦法。在底下加真空，也能在一定程度上解決這個(gè)問題。
不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能，但其價(jià)格相對(duì)很貴。如果，只有很小的分離任務(wù)且經(jīng)費(fèi)也允許，市面上直徑為1cm的小型制備柱就是首選。有機(jī)玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕，相對(duì)不銹鋼柱子而言，它是半透明的，可以看到液體的運(yùn)行狀態(tài)，對(duì)有色的物質(zhì)其特點(diǎn)就更為突出。

裝柱方法的選擇

根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法，往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大，顆粒度的減少會(huì)導(dǎo)致裝柱的難度。一般來說，顆粒直徑小于20－30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊－裝填”技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相。濕法的目的是迫使相對(duì)稀松的 固定相懸漿以高速裝入色譜柱子，從而減少空隙的形成。然而，當(dāng)柱直徑大于20mm，所加壓力為30－40bar時(shí)，高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復(fù)雜。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱，可采用柱長壓縮技術(shù)。這種方法，先將固定相懸漿（或偶爾是干填充物）裝入柱中加壓，利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種：徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設(shè)備，在柱子填完后，應(yīng)用有柱效的測量，對(duì)柱效低的柱子應(yīng)該重填。

流動(dòng)相的選擇

除了和分析色譜同樣的考慮外，在選用流動(dòng)相時(shí)，要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作。一般來說，不宜采用高毒性溶劑，對(duì)多元溶劑要盡可能的少用。如果產(chǎn)品中含有大量溶劑，溶劑的純度也要考慮在其中。

組分保留時(shí)間的估計(jì)

用分析柱子在同等色譜條件下（同樣的固定相和流動(dòng)相）測定保留時(shí)間后，按照單一組分的線流速（不是體積流速）一定，通過計(jì)算可以知道組分的大致保留時(shí)間區(qū)域。分析譜圖的峰形狀，對(duì)確定保留時(shí)間也有很大的參考價(jià)值。

產(chǎn)品的收集

手工餾分收集費(fèi)時(shí)費(fèi)力，自動(dòng)餾分收集器有很大的方便。許多實(shí)驗(yàn)室和工廠都采用了餾分收集器。

超載、邊緣切割、中心切割、放大技術(shù)與非線性效用

在制備色譜中，因?yàn)闆]有必要達(dá)到分析色譜那樣的分離度，可以在一定范圍內(nèi)大大加大進(jìn)樣的濃度和體積。在做分離的時(shí)候，也有一些分析色譜的時(shí)候，不能用到的技巧。因?yàn)槠P(guān)系，不在這里敘述。

柱轉(zhuǎn)換技術(shù)

通過接頭或者閥門，實(shí)現(xiàn)柱子的簡單延長，或者比較方便地實(shí)現(xiàn)對(duì)其中一個(gè)（或幾個(gè)）組分的精制。

新制備技術(shù)

模擬移動(dòng)床可以連續(xù)進(jìn)樣，并可以利用邊緣切割效用，而且采用了柱切換技術(shù)，能更好的利用溶劑和填料，已經(jīng)應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。其理論和技術(shù)也日益完善。迎頭色譜、超臨界流體色譜、逆流色譜環(huán)形色譜、氣相制備色譜等在科研和工業(yè)生產(chǎn)中也得到了應(yīng)用。

制備液相的使用及技術(shù)特點(diǎn)就介紹到這里，還已有更多需要?dú)g迎聯(lián)系集思儀器。

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