【技術(shù)分享】教你如何驗證高壓滅菌器滅菌效果

微生物實驗室最少不了的實驗儀器之一就是滅菌器，一般實驗室常用的是高壓蒸汽滅菌器。GB 4789.1-2016中要求：實驗設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行檢查和/或檢定（加貼標(biāo)志）、維護(hù)和保養(yǎng)，以確保工作性能和操作安全。但你的滅菌器有沒有類似的檢查呢？如果要做類似的驗證，又需要怎么做呢？今天就給大家匯總一下高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證的相關(guān)內(nèi)容。

高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證一般有化學(xué)指示劑法、留點溫度計法、自制測溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過驗證滅菌時滅菌器里的溫度能否達(dá)到要求。我們可以根據(jù)自己實驗室的具體情況選擇其中一種或多種方法進(jìn)行驗證。

一、化學(xué)指示劑法

原理：化學(xué)指示劑在一定溫度與作用時間下，會受熱變色或變形，根據(jù)這一特點來判斷是否達(dá)到需要的滅菌參數(shù)。

一般實驗室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來判斷滅菌效果。它是由熱敏化學(xué)物質(zhì)與顯色劑及漆輔料制成油墨，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外，長度不低于5cm，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果；在121℃持續(xù)20min或130℃持續(xù)4min后，膠帶上印有的斜行的白色指示線條會完全變黑，成為黑色線條；如變色不均勻或不徹底，可認(rèn)為該包裹不符合滅菌條件。

二、留點溫度計法

原理：留點溫度計法是利用水銀溫度計不回流的特性，其原理跟傳統(tǒng)體溫計相似，可以指示滅菌器在滅菌過程中達(dá)到的最高溫度。

驗證時把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里，滅菌時把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結(jié)束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致。此法只能驗證溫度，不能指示滅菌時間是否達(dá)到要求，因此是滅菌器驗證的最低標(biāo)準(zhǔn)。

三、自制測溫管法

原理：利用一些化學(xué)藥品受熱熔化后再冷卻，晶體的外形不同的特性，把化學(xué)藥品密封在小玻璃管內(nèi)，滅菌時放在滅菌器里，滅菌完后觀察晶體的形狀，就可以判斷溫度是否達(dá)標(biāo)。

常用的試劑是苯甲酸，苯甲酸的熔點為121-123℃，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合，因此滅菌時把固體苯甲酸密封在小玻璃管內(nèi)放進(jìn)滅菌器，滅菌結(jié)束就可以觀察苯甲酸的狀態(tài)來驗證滅菌器是否達(dá)到了要求溫度。這種方法的局限跟留點溫度計法相同，也只能指示滅菌時的溫度，對滅菌時間是否達(dá)到要求無法判斷。

四、生物指示劑法

原理：利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌，來測定熱力滅菌的效果。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對熱的抗性較強(qiáng)，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此為指示菌，驗證滅菌器能否達(dá)到滅菌要求。

生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養(yǎng)基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點：下層的前、中、后和上層、中層的中央點。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培養(yǎng)2-7天，若培養(yǎng)基澄清、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死，滅菌器滅菌效果良好；如果培養(yǎng)基黃色渾濁，說明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此。

目前實驗室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養(yǎng)液玻璃小管，將指示管放在滅菌容器內(nèi)的各個點上，高壓滅菌后，將管中盛培養(yǎng)液的玻璃管擠碎，培養(yǎng)液從內(nèi)部的小管中被放出，放入56℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時做陽性對照。若是滅菌器滅菌效果不合格，指示管內(nèi)的芽孢復(fù)活后生長會改變?nèi)鉁念伾侨鉁優(yōu)辄S色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內(nèi)芽孢被滅活不再生長，肉湯仍舊是原來的紫色。

對于滅菌器的效果驗證，目前并沒有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格的要求驗證的頻次，但是實驗室應(yīng)當(dāng)自行制定驗證頻次規(guī)定，并嚴(yán)格按照要求進(jìn)行。從操作性和驗證結(jié)論兩個方面出發(fā)，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管，因為這兩種方法操作簡單，可以對滅菌效果進(jìn)行全面的驗證。

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