液相色譜對于多數(shù)人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年、經(jīng)驗(yàn)豐富的分析員都會習(xí)慣于一些錯(cuò)誤的操作，就會經(jīng)常導(dǎo)致一些儀器故障。

方便快捷的分析過程固然重要，但是為了多做樣品而忽略了一些必不可少的步驟，往往得不償失，哪些操作不能做？哪些懶兒不能偷？那些小概率的故障師傅沒教怎么辦？本文一一告訴你哦！

一、流動(dòng)相不過濾

因?yàn)閴m?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。而且流動(dòng)相最好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。

二、使用后沒有及時(shí)清洗泵

流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時(shí)間的情況下。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。

因此，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

三、流動(dòng)相走空

泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動(dòng)相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。

沒有流動(dòng)相流出，又無壓力指示怎么辦？可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時(shí)可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。

四、壓力和流量不穩(wěn)了？

原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯@時(shí)，可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。

那壓力為啥過高或過低？可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行。

在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視。

PS：在液相色譜中對組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個(gè)分析周期中，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個(gè)復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的。

梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：

1.縮短分析周期；

2.提高分離能力；

3.峰型得到改善，很少拖尾；

4.增加靈敏度。但有時(shí)引起基線漂移。

五、梯度洗脫的流動(dòng)相選擇不當(dāng)

要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時(shí)更要引起注意。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí)，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心。

六、忽略的空白梯度洗脫

梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強(qiáng)溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡。

七、忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化

混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時(shí)常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當(dāng)二者以相近比例混合時(shí)粘度增大很多，此時(shí)的柱壓大約是甲醇或水為流動(dòng)相時(shí)的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。

八、關(guān)于六通閥的正確使用和維護(hù)

樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞。

為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。

九、關(guān)于色譜柱的使用和維護(hù)

色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。

1.調(diào)節(jié)流速過快

避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩（如前所述）。

2.反沖色譜柱

一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。

3.預(yù)柱和保護(hù)柱

選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

十、【來自前輩的經(jīng)驗(yàn)】小概率故障如何排除？

1. 泵壓跳動(dòng)，跳動(dòng)范圍10bar左右

解決方法：

原先小白頭有點(diǎn)臟，更換后尚未解決；

將主動(dòng)閥上的閥芯取出后，發(fā)現(xiàn)有類似氣泡存在，浸入甲醇-水溶液超聲5min，以試著去除氣泡，重新將其安裝后再觀察，仍未解決；

更換新的閥芯，將其安裝后，不再有跳動(dòng)，觀察一段時(shí)間后比較平穩(wěn)，成功解決。

2. 發(fā)生故障

plug homing over pressure；

灌注及設(shè)流速時(shí)均無壓力也不見液體流出；

檢測器光閘不能復(fù)位④進(jìn)完大濃度樣品后，進(jìn)空白相應(yīng)位置也出峰。

可能原因：

在線過濾器堵了；

泵頭下單向閥堵了；

有可能是檢測池臟了，也有可能是光路有點(diǎn)堵，再不行可能是燈壽命到了；

小抹布臟了，需要換。

解決方法：

1. 在線過濾器卸下來，置燒杯，加純化水煮沸5-10分鐘后甲醇超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀硝酸泡，還不行的話就換新的了，這本身是個(gè)消耗品；

2. 把泵頭下單向閥卸下來，兩個(gè)都有可能堵，剛卸下來時(shí)豎著在耳邊搖一搖是聽不到聲音的。簡單的拿洗耳球把單向閥吹吹就行了（注意方向），吹了沒反應(yīng)可以拿溶劑超聲，但不可水煮，一般超至在耳邊搖能聽見聲音就不影響實(shí)驗(yàn)；

3. 先用溶劑把檢測池沖沖，用啥試具體樣品而定；若沖了還不行，把檢測池卸下，看燈能量，若能量還可以（有個(gè)幾千），可能得清洗光路了。第一次清洗的話建議還是叫工程師來，因?yàn)榇謇淼牟考跈z測器的最下方，有一個(gè)黑色片片，中間有一條縫，而且那一塊的螺絲都是八角的，卸起來很麻煩；

4. 把5個(gè)樣品盤都拿出來，可以看見里面有一個(gè)黑色突起（看不清用手電筒），平時(shí)進(jìn)樣針就是從那個(gè)地方吸樣的。手伸進(jìn)去就可以卸下來，里面有一個(gè)小白圈圈（用多了自然就黑了），換一個(gè)新的就行了，買儀器時(shí)一般配有10個(gè)。

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